1、使用赛多培®噬菌体抑制剂与现有噬菌体防治手段相比有哪些优势？
在生物医药（抗生素、疫苗、蛋白药物、基因治疗载体）、工业酶制剂、生物反应器工艺研究等依赖大规模细菌培养的领域，传统防治噬菌体的方法（如设备消毒、菌种轮换）成本高且无法完全预防噬菌体污染，如果一旦发生噬菌体污染，会导致批次发酵失败，造成大量物料损失和人工成本的浪费。传统噬菌体消杀步骤繁琐，且需要耗费大量时间，影响研发和生产进度。
赛多培®噬菌体抑制剂可以作为细菌培养的保护剂使用，尽最大可能保证发酵成功率，避免物料损失，同时减轻了环境消杀等成本。抑制剂作为直接添加的解决方案更便捷。
2、噬菌体抑制剂抑制噬菌体的原理是什么？抑制剂的添加会影响菌的生长和蛋白表达水平吗？
赛多培®噬菌体抑制剂主要抑制噬菌体的生长繁殖。根据我们实验验证，进行大肠杆菌培养时，用富营养培养基例如TB培养基、2YT培养基、赛多培®增强型LB预混培养基、赛多培®大肠杆菌高密度表达培养基等，抑制剂的添加不会影响菌的正常生长。若使用普通LB培养基，因为营养不充分，噬菌体抑制剂的添加对菌的生长有抑制作用，可以尝试用如下方案减小噬菌体抑制剂对菌的抑制作用：①延长细菌培养时间2-4h；②根据环境爆发的剧烈程度，尝试减量使用；③通过增加溶氧的方式提高菌的生长速度；④若使用摇瓶培养，建议抑制剂在OD600在0.8-1之间的时候添加噬菌体抑制剂，若使用发酵罐培养，菌生长到OD600 1-2左右再添加抑制剂，上述四种方案可以根据实际实验需求组合使用。
噬菌体抑制剂的添加对蛋白的正常表达不会产生影响。
3、说明书中，噬菌体抑制剂的用量是一个范围值，在使用时究竟按照什么比例添加？
通常情况下，每升培养基添加2毫升抑制剂液体（1000:2）即可显著发挥抗噬菌体效果，保障菌体正常生长。
在噬菌体污染严重的环境中，或使用发酵罐进行高密度发酵时，为保证噬菌体抑制效果，每升培养基可添加6毫升抑制剂液体（1000:6）。
抑制剂在富营养的培养基中，最高可以加到10ml，LB培养基中可以最高加到6ml。建议2ml考虑的是使用成本问题以及菌体生长速率问题。我们的建议用量主要考虑使用成本、菌体生长速率以及噬菌体污染情况确定的。如果环境中噬菌体处于高爆发期间，建议增加用量。
4、加噬菌体抑制剂一点效果都没有，什么原因？
添加噬菌体抑制剂没有效果的原因有多种，经过我们与客户沟通，常见有如下原因：①摇瓶培养发现过夜菌不长，大概率是菌种活性问题，同时也需要观察是否存在培养条件失控、装液量过大的情况；②环境中噬菌体爆发期，建议通过小型梯度实验，摸索合适用量；③实验室内部除了噬菌体之外，可能存在真菌、曲霉、金黄色葡萄球菌等杂菌污染，这就需要进行严格的消毒处理、执行严格的无菌操作规范，以避免杂菌污染带来的影响。
为此，我们根据实际操作经验，可以通过下面方法对培养体系的污染情况进行判断：
如果只有细胞碎片，大概率是噬菌体污染；
如果OD600值在1以下时菌出现死亡（菌体生长1-3小时，诱导前），则考虑感染烈性噬菌体；
如果OD600值在1到2之间，诱导之后逐渐开始死亡（有些1-3小时，有些5小时左右），则考虑温和噬菌体污染；
如果同时伴有白色絮状物，或粘性的，或拉丝状的，或蘑菇状的，或有聚集状白色的，则考虑伴随杂菌污染。
5、添加抑制剂后，细菌在发酵罐中前期不生长或生长缓慢？
出现OD600值到2-3后，不再增长时，请仔细检查发酵罐罐压是否稳定，建议增加通气量。
如果生长缓慢，那么建议抑制剂在OD600 1-2左右时进行添加。
环境恶劣的情况下，在诱导时进行抑制剂补加，具体用量视环境污染程度而定。
6、用发酵罐发酵时，添加了抑制剂，前期比较正常，但后期出现菌体死亡，这是什么原因？
出现这种情况，主要应对发酵操作过程进行排查。以下原因往往会导致发酵后期菌体死亡：
① 营养物质耗尽。发酵后期，碳源（如葡萄糖）、氮源（如铵盐）或其他关键营养（如磷酸盐、微量元素）可能耗尽，导致细菌无法维持代谢活动。主要表现为溶氧突然上升（细菌停止耗氧）、pH异常波动（代谢活动停滞）。
② 代谢产物积累。细菌代谢产生的副产物（如乳酸、乙酸、乙醇、氨、CO₂等）可能达到毒性浓度，抑制生长甚至导致死亡。
③ 溶解氧（DO）不足或过量。
好氧菌：后期菌体密度高，需氧量大为增加，若供氧不足（搅拌或通气不足），会导致缺氧死亡。兼性厌氧菌：过量溶氧可能诱导氧化应激反应（如自由基积累）。
④ pH失控。代谢产物（如有机酸、碱）导致pH超出菌种耐受范围，影响酶活性和细胞膜稳定性。
⑤ 温度波动。发酵后期代谢产热增加，若冷却系统失效，温度升高可能引起蛋白质变性或代谢紊乱。
⑥ 菌种自身问题。质粒丢失、基因突变或代谢途径异常（如过度表达外源蛋白导致“代谢负担”）。
⑦ 杂菌或噬菌体污染。杂菌竞争营养或分泌毒素。如果添加了噬菌体抑制剂，一般不会在后期出现噬菌体感染导致细菌裂解情况，但也存在因通气带来噬菌体持续性输入，影响抑制剂效果，建议补加噬菌体抑制剂。
7、抑制剂是否再次灭菌？该如何添加？
赛多培®噬菌体抑制剂生产过程中，会进行0.22μm过滤除菌和高温灭菌处理，无需再次灭菌。可以按照说明书指导比例或实际需要的比例，直接加入到摇瓶或发酵罐的培养基（灭菌后）中，添加方式与抗生素相同。
8、噬菌体抑制剂大量使用一段时间后是否会产生抗药性呢？
不会产生任何抗药性，请放心使用。
上一篇： 没有了
